反相Flash柱层析能够干法上样吗？

柱层析 是有机合成中最常用的别离纯化手段，大公司合成尝试室一般都装备主动化水平比力高的别离纯化东西---快速造备色谱仪(中低压造备色谱)，在医药外包公司俗称过柱机。由名字可知，那就是个替代手工过柱的东西，他所用到的柱子我们常叫它Flash柱。除了能够用来过硅胶正相柱，还能够过乙腈(甲醇）/水系统的C18填料的反相柱，反相柱必然水平上能够替代造备高效液相色谱，出格是大量样品别离时，能够节省大量成本。

往期文章: 【 柱层析手艺 】中已经详细介绍了湿法上样和干法上样，文章中次要是介绍了硅胶柱柱层析手艺，因而用过柱机过正相硅胶柱时情况类似。

关于 乙腈(甲醇）/水系统的C18填料的反相柱，湿法上样是应用最普遍，利用最简单的上样手艺。若是是固体样品，只需将样品间接消融在尽量少的溶剂中，然后注入色谱柱中即可完成上样，而若是是液体样品，其上样体例则会更简单，间接将样品注入色谱柱即可。但是湿法上样有一些缺点：1、当上样体积增大时，样品在色谱柱傍边所占用的体积会增大，扩散效应也会明显加强，招致色带变宽，降低别离效率，纯度也随之降低；2、请尽量利用大极性的溶剂消融样品，若是极性过小，样品还没有来得及和固定相彼此感化，就已经被极性溶剂洗脱下色谱柱，招致保留时间不敷，洗脱不充实，别离效率大大降低。出格是极性出格大的样品，湿法上样后很容易间接把样品冲出，没有别离效果。

C18反相柱能否像正相硅胶柱一样，拌样后，停止干法上样呢？

小编亲试，完全能够停止干法上样，独一的缺点就是C18填料有点贵，但是拌样后的C18填料能够冲刷清洁后能够反复操纵。与硅胶柱的拌样类似，先用沸点较低溶剂消融样品，参加C18硅胶后，旋干，然后将干粉转移到空柱子中，填料上方加上筛板或脱脂棉都能够，旋紧，将上样柱接在反相柱上间接过柱就能够了（建议先将反相柱平衡好，接上上样柱后间接运行梯度）。

反相柱干法上样比拟湿法有以下长处：一、干法上样峰型变窄，别离效果明显进步。二、别的关于一些消融度较差的样品，若是操纵湿法上样，需要用大量的溶剂消融，因而上样量遭到限造，若是一次上太多，别离效果很差，但干法上样克制了此缺点。三、还有一些样品湿法上样注入反相柱后，间接从水比拟例较高的梯度起头冲柱时，产物会敏捷析出，招致柱子堵住，干法上样则很少堵柱。四、关于大极性的化合物（LCMS保留时间在0.*min以内的化合物），湿法上样，有时间接用水相就能够将化合物冲出，用干法上样则能够明显进步柱效以及别离样品纯度。

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