请教western blot转膜的原理?

4年前 (2021-07-05)阅读1010回复0
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蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。目前主流方法是电转印法,分为湿式转印与半干转印。湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。以E-Blotter湿转槽为例,一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体,将内部垂直电泳电极替换为湿转的转印芯,将胶块、滤纸、转印棉夹到转印芯内部,将槽体倒满缓冲液通电进行电转印。半干转印是将胶块水平方向夹在半干转印槽内进行电转印。以Yrdimes半干转印槽为例,将滤纸、转印棉用缓冲液浸润后,与胶块一起夹到转印槽内,通电进行电转印。一般来说湿转相对半干转印速度上要慢,设备成本上半干转印槽也相对更贵。通常小分子量的蛋白半干转效果比较好,大分子量(100KD)以上建议湿转。

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